近日，重庆市畜牧科学院开发了针对猪流行性腹泻病毒S1S2J蛋白的抗体并建立了一种简便的小鼠单克隆抗体类型鉴定方法，相关研究结果发表于《AMB Express》2023年第13卷第1期。

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的，影响所有年龄的猪。该病以呕吐、急性腹泻和脱水为特征，新生儿仔猪死亡率高，给养猪业造成了严重的经济损失。PEDV是冠状病毒科的一员，是一种包膜单链RNA病毒，其表面的刺突(S)蛋白易发生突变，可以诱导病毒中和抗体。PEDV根据其S蛋白的变异可分为基因1型 (G1)和基因2型（G2）。G1型包括经典菌株(如原型菌株CV777)， G2型包含了S基因的各种插入和删除突变。这些突变导致了许多目前基于S蛋白的抗体实现不能有效的诊断或保护。因此，开发可用于PEDV感染综合研究的抗体至关重要。

S1/S2连接（S1S2J）切割位点被认为是S蛋白中相对保守的区域。有研究表明，S1/S2连接切割位点是蛋白酶介导冠状病毒入侵细胞的主要决定因素之一。因此，重庆市畜牧科学院所开发的靶向猪流行性腹泻病毒S1S2J蛋白的抗体，特异性的选择了PEDV-AJ1（G2型代表性菌株）的S1S2J蛋白作为靶蛋白，利用Expi293真核表达系统制备了S1S2J蛋白抗原，对小鼠进行免疫，通过经典的杂交瘤技术筛选并获得了三株具有高结合活性的IgM型单克隆抗体（mAb），分别为3-5G,7-9D和8-3B。

研究结果揭示了这些mAb的特征，三种抗体均属于IgM型，抗原表位为线性，流式和间接免疫荧光验证了三种抗体能够与感染PEDV-SP-C株（G1型）的Vero E1细胞结合，ELISA法测定了三种抗体的EC50值分别为26.293μg/mL, 14.337μg/mL和62.984 μg/mL。这些mAb可用作诊断试剂的检测抗体或科研用抗体。同时，我们还建立了一种简便的小鼠单克隆抗体类型鉴定方法，利用特异性引物区分小鼠免疫球蛋白的不同类型，可用于鉴定小鼠mAb的不同类型。该研究结果为PEDV相关研究奠定了良好的基础。

PEDV-S1S2J抗体的制备

PEDV-S1S2J抗体的功能验证